Analiza zamrznjenih odsekov
To je potrebno, če kirurg potrebuje informacije o tkivu, odstranjenem med operacijo, da se lahko odloči o poteku posega. Na primer, majhen maligni tumor odstranimo iz ledvice. Zdaj je potreben hiter rez, da se ugotovi, ali je bil tumor popolnoma odstranjen ali pa je na robovih vzorcev tkiva še vedno ogromno količin malignega tkiva.
Na koncu rezultat pregleda zamrznjenega odseka določi potek operacije in pacientov nadaljnji načrt terapije. Kako deluje zamrznjeni izpit? V 10 minutah se tkivo stabilizira z zamrzovanjem pri -20 ° C, nato se na tako imenovanem mikrotomu naredi 5 - 10 μm debel rez. Ta se postavi na diapozitiv, majhno stekleno ploščo in hitro obarva. Na koncu ugotovitve pregledajo pod mikroskopom in rezultat lahko takoj posredujejo v operacijsko sobo.
Metode obarvanja
V zadnjih 120 letih se je razvilo veliko histoloških metod barvanja. Na podlagi barvne reakcije z barvili se celične strukture in tkiva delijo na bazofilne, acidofilne in nevtrofilne celice. Poleg tega obstajajo tudi agrofilne in nukleofilne strukture.
Bazofilno obarva vse, kar vsebuje kislinsko skupino in je obarvano z osnovnim barvilom (na primer hematoksilin ali metilen modro). Acidofilne strukture so osnovne in jih je zato mogoče obarvati z erozijo ali kislim fuksinom (kislinska barvila). Sem spadajo citoplazma in kolagen vlakna.
Nevtrofilne ali lipofilne komponente ne morejo reagirati niti s kislim niti z bazičnim barvilom in jih zato ni mogoče obarvati. Agirofilne komponente lahko vežejo srebrove ione in jih pretvorijo v osnovno srebro. Nukleofilna barvna reakcija (jedro = celično jedro, ki ljubi celično jedro) je posledica nukleofilnih barvil v celično jedroTo so DNA vezavne ali osnovne snovi, ki se vežejo na nukleinske kisline.
Danes so dobro preizkušene kemične metode barvanja dopolnili z imunološkimi metodami. V tej tehniki se za odkrivanje določenih lastnosti celic uporablja reakcija antigen-protitelo. Nato lahko reakcijo s sofisticirano tehniko vidimo.
Pogosto uporabljene metode obarvanja so: HE obarvanje = obarvanje s hematoksilinom in eozinom: Hematoksilin, naravno barvilo, obarva vse strukture v modro, ki so bazofilne (= ljubeče do baze) in zato kisle, kot so DNA, celična jedra, ribosomiitd. Eozin pa se proizvaja sintetično. Eozin obarva vse celične strukture rdeče, če so acidofilne (= kisloljubive) ali bazične.
O beljakovin citoplazme, mitohondrijiin kolagen so med njimi. Azan obarvanje: Sestavljen je iz prvih črk obeh barv, azokarmina G in anilinske modro-zlate oranžne: Ta madeži celično jedro mišična vlakna pa rdeča, citoplazma pa rdečkasta. Kolagen in mrežasta vlakna v tem obarvanju postanejo modra.
Za obarvanje se uporablja madež Giemsa (Giemsa's Azure-Eosin-Methylene Blue) kri brisi celic. Jedra celic lahko zlahka prepoznamo po reakciji vijolične barve. Citoplazma obarva modrikasto.
Na barvanju elastike (resorcinol-fuksin-orcein) so vsa elastična vlakna prikazana v črno-vijolični barvi. Za metodo obarvanja van Giesona je značilno dejstvo, da se obarvanje najprej izvede s hematoksilinom. Nato se uporablja fuksin pikrinske kisline (mikro fuksin) ali tiazin pikrične kisline.
Na koncu so jedra celic videti črno-temno rjava, citoplazma pa precej svetlo rjava. Protibarvanje s tiazinom pikrične kisline obarva elastična vlakna in mišično tkivo oranžno rumeno, kolagena vlakna pa rdeče. Pri trikromskem obarvanju po Masson-Goldnerju je velikost molekule barvila najpomembnejši dejavnik pri metodi obarvanja.
Uporablja se železov hematoksilin, običajno s tremi dodatnimi barvili, in sicer kislo lisico, oranžno G in svetlo zeleno. Obarva kolagena vezivnega tkiva in sluz zelena, celična jedra modro-črna, citoplazma rdeča, mišice bledo rdeče in rdeče kri celice (eritrocitov) oranžno-rdeča. Poleg tega obstaja obarvanje po Gramu, ki služi za razlikovanje bakterije.
Gram-pozitivno bakterije so obarvane modro, po Gramu negativne bakterije pa rdeče. Ziehl-Neelsen barvanje se uporablja tudi za bakterije, in sicer tiste, ki so odporne na kisline in na primer kaže tuberkuloza patogeni v rdeči barvi. Druge metode barvanja, ki jih je treba omeniti tukaj, so reakcija Berlin-Blue, ki je odgovorna za odkrivanje trivalentnih železovih ionov v odsekih tkiva, in metoda barvanja železovega hematoksilina po Heidenhainu.
