Odkrivanje tkivnih struktur, protitelesain patogeni z imunskim označevanjem je priljubljen, sodoben in natančen. Imunofluorescenca se nanaša na imunsko označevanje s pripravljenim fluorescentom protitelesa ki se svetijo pod UV svetlobo. Pri neposredni imunofluorescenčni detekciji se preskusni substrat pregleda neposredno z luminiscenco protitelesa, brez primarnih protiteles ali umetnih antigenov.
Kaj je imunofluorescenčna neposredna detekcija?
Tumorsko specifične antigene v tumorskem tkivu lahko neposredno odkrijemo z imunofluorescenco. Tako je mogoče ugotoviti, kje v telesu obstaja obstoječe metastaze je prišel iz. Neposredno odkrivanje imunofluorescence je diagnostična metoda, ki temelji na ugotovitvah v imunologiji, imunskem barvanju in imunohistokemiji. Poudarek je na sposobnosti protiteles, da se vežejo na določena mesta v tkivu ali na antigenih v serumu. Ta mesta so epitopi. V biokemični diagnostiki obstajajo umetna protitelesa ali mimetiki (v ednini: mimetični), ki omogočajo označevanje teh vezi protitelesa in antigena s fluorescenco ali radioaktivnostjo. Konjugati umetnih protiteles se dejansko vežejo na epitope na eni strani in imajo fluorescentni marker v primeru imunofluorescence na drugi strani. To je alternativa uporabi radioaktivnih označevalcev. Posebnost neposrednih zaznav imunofluorescence v primerjavi s posrednimi zaznavami je, da je protitelo, ki se veže na epitop antigena v preučenem materialu, hkrati že konjugat protiteles s fluorescentnim markerjem. Dodatna protitelesa za vstavljanje niso potrebna za neposredno odkrivanje. V imunofluorescenci fluorescein, ki sveti pod UV svetlobo, in fluorescein izotiocianat (FITC) se uporabljata kot barvila za izdelavo konjugatov umetnih protiteles. Kolikor se bere nekoliko zapleteno, so pa neposredne imunofluorescenčne detekcije običajne medicinske metode laboratorijska diagnostika za številna različna zdravstvena vprašanja. Protitelesa, ki vsebujejo fluorescentno barvilo, so na voljo pripravljena za prodajo.
Funkcija, učinek in cilji
Za preiskave tkiv za obarvanje določenih struktur v tkivu so na voljo neposredni detektorji imunofluorescence. Obstajajo pa tudi za posamezne celice. Tu ima pretočna citometrija veliko vlogo. In končno, obstajajo imunski testi, sestavljeni iz trdne in tekoče faze. Študije imunofluorescenc na tkivih so pomembne predvsem pri onkologiji, torej pri zdravljenju rak. Tumorsko specifične antigene v tumorskem tkivu lahko neposredno odkrijemo z imunofluorescenco. Ti pregledi vzorcev tkiv iz tumorjev so pogosto pomembni za ugotovitev, kje v telesu obstaja metastaze ali pa tudi za oblikovanje presoje, ali je tumor benigni ali maligni. Preiskava posameznih celic z neposredno imunofluorescenčno detekcijo se uporablja za iskanje virusnih antigenov, bakterijskih antigenov in drugih epitopov. Na primer, izvemo, ali so celice okužene z virusom in v kateri fazi okužbenega cikla so celice. FACS (= razvrščanje celic, aktivirano s fluorescenco) je zelo učinkovita metoda pretočne citometrije, pri kateri se celice s fluorescentno označenim materialom porazdelijo v različne epruvete, odvisno od vrste obarvanja. Ta metoda je pomembna v imunologiji, hematologija in infektiologija. Imunofluorescenčni imunološki testi omogočajo neposredno zaznavanje toksinov v okolju, gensko spremenjenih organizmov in nekaterih dodatkov v hrani. V tej poskusni postavitvi sta vedno trdna in tekoča faza. Številni patogeni, Vključno z AIDS-povzročitelj virusa HI, lahko tudi neposredno zaznamo. Vendar pa pri odkrivanju nalezljivih in avtoimunske bolezni, cilj je pogosto odkriti protitelesa in ne antigene. To so obrambe molekule ki jih proizvaja lastno telo imunski sistem. Taka odkrivanja potem niso neposredna odkrivanja v skladu s tu predstavljeno definicijo, saj se fluorescenčna protitelesa ne povezujejo neposredno z lastnimi antigeni telesa, temveč z antigeni testnega sklopa. Ti antigeni eksperimentalnega sklopa se nato povezujejo z endogenimi protitelesi. Samo v posebnih testih za odkrivanje in potrditev so neposredna odkrivanja imunofluorescenc, ki se uporabljajo za pogoste okužbe, na primer HI virusi in Klamidija. Obstajajo testi za številne druge bolezni. V večini primerov je posredno odkrivanje protiteles boljše za nalezljive bolezni ker telo imunski sistem ima iznajdljivo sposobnost, da se spomni predhodnih okužb. V drugih primerih se neposredno odkrivanje antigenov in posredno odkrivanje protiteles dopolnjujeta. Slednji kažejo, da se je okužba zgodila že prej, medtem ko prvi zagotavljajo natančnejše informacije o trenutnem stanju aktivnosti patogena.
Tveganja, neželeni učinki in nevarnosti
Tudi pri neposredni imunofluorescenčni detekciji, tako kot pri vseh medicinskih, obstajata dve tveganji: tveganje lažno pozitivnega rezultata in tveganje lažno negativnega rezultata. Lažno pozitivni rezultati povzročajo pacientu psihološko nelagodje in zelo veliko stisko. Zato se pozitivnim rezultatom dodajo dodatni postopki testiranja, zlasti kadar diagnoza vodi do drastičnih življenjskih sprememb. Nevarnost lažno negativnega rezultata je, da bolnik ne izve pravočasno za svojo nevarnost zdravje in morda celo za javno zdravje. Zato je dobro narediti veliko raziskav in pripraviti za prodajo veliko število različnih neposrednih imunofluorescenčnih detektorjev ter jih ponuditi. Skupaj z drugimi metodami neposrednega in posrednega odkrivanja bolezni in patologij to poveča natančnost diagnoze. Neposredne detekcije temeljijo na konjugatu protiteles, ki se na eni strani veže na epitope antigenov, na drugi strani pa hkrati povzroči tudi fluorescenco. Tak izdelek se zato uporablja samo pri enem tipu preskusnega postopka in se ne uporablja za druge vrste preskusov. To je pomembna, postopkovna razlika od posredne detekcije, pri kateri se primarna protitelesa uporabljajo za vezavo epitopa pred fluorescentnimi protitelesi. Konjugat protiteles je torej primeren za različne teste. Ta postopkovna razlika se razlikuje od zdravstvene razlike med posrednim odkrivanjem protiteles in neposrednim odkrivanjem antigenov.
