Postopek
Če se izvede neposreden Coombsov test, rdeča kri celice se filtrirajo iz pacientove krvi. Preizkusiti je treba, ali obstajajo protitelesa tipa IgG na njih, ki povzročajo hemolitično anemijo oz kri skupinska nezdružljivost v telesu. Serum Coombs vsebuje protitelesa proti človeškim protitelesom IgG.
Zmes dlje časa segrevamo (inkubiramo). Če obstajajo protitelesa na rdeči kri celice, se bodo strnile skupaj in test bo pozitiven. Posredni Coombsov test je sestavljen iz dveh delov.
Cilj je določiti protitelesa, ki so prosto prisotna v krvi in niso vezana na krvne celice. Tokrat se tekoči del (serum) filtrira iz pacientove krvi. Najprej se v test serumu dodajo rdeče krvne celice.
Če so v serumu prosta protitelesa, se ta vežejo na rdeče krvne celice. Ta reakcija ni vidna. Šele v drugem koraku, tako kot v neposrednem Coombsovem testu, dodamo in segrejemo Coombsov serum s protitelesi proti človeškim protitelesom. Če je rezultat pozitiven, raztopina tudi aglutinira.
Vrednotenje
Ko se protitelesa kombinirajo z ustreznim serumom Cooms, se protitelesa v serumu (tekoči del krvi) vežejo na protitelesa pacienta. Protitelesa imajo strukturo v obliki črke Y, kar pomeni, da lahko vedno vežejo dva vezavna partnerja in tako medsebojno križajo rdeče krvne celice. Posledica tega je veliko kopičenje krvnih celic.
Te kepe postanejo vidne - kri se aglutinira (strdi) in test je pozitiven. Če bolnik nima protiteles, ostane serum tekoč. Spremembe ni mogoče opaziti - test je negativen.
Kakšne so druge možnosti?
Alternativa Coombsov test je imunološki postopek ELISA (encim-linked Immunosorbent Assay), pri katerem so določena protitelesa označena z encimom. To protitelo se doda preskusni raztopini. Če označena protitelesa reagirajo s protitelesi preskusne raztopine, se vezani encim aktivira in tvori barvilo.
Ustrezne epruvete spremenijo barvo - test je pozitiven. Poleg postopka ELISA obstaja tudi WESTERN-Blot, ki se pogosto uporablja kot potrditveni test za pozitiven ELISA.
