Imunoelektroforeza se uporablja za laboratorijsko diagnostično odkrivanje monoklonov protitelesa pri pacientu kri. Monoklonska protitelesa izhajajo iz iste celice in so usmerjeni proti istim antigenom. Zaradi tega veljajo za patološke in ob odkritju nakazujejo na bolezni, kot je Waldenströmova bolezen.
Kaj je imunoelektroforeza?
Imunoelektroforeza se uporablja za laboratorijsko diagnostično odkrivanje monoklonov protitelesa pri pacientu kri. Ioni imajo različno gibljivost. Ta diferencialna gibljivost je osnova metod elektrofereze. Te metode ločujejo različne snovi med seboj z uporabo električnih polj in gravitacije. Ena od dobro znanih metod s tega področja je imunoelektrofereza. To je kvalitativni diagnostični postopek, ki se uporablja za odkrivanje monoklonska protitelesa. Protitelesa so imunološko aktivne beljakovinske snovi določene celične linije. Monoklonska protitelesa vsi izvirajo iz istega limfocita B in so zato usmerjeni proti enemu epitopu. Vsak naravni imunski odziv proti napadalnim antigenom ustreza poliklonskemu odzivu in je tako usmerjen proti različnim epitopom. Monoklonski imunski odziv torej dokazuje patološke telesne procese. Monoklonska protitelesa vežejo drugače molekule z visoko specifičnostjo. To vezavo lahko zazna imunoelektroforeza. Metoda je kvalitativni laboratorijski diagnostični postopek in je sestavljena iz dveh vrst postopkov, serumske elektroforeze in imunske difuzije.
Funkcija, učinek in cilji
Imunoelektroforeza združuje metodologijo serumske elektroforeze z imunsko difuzijo. Pacientov serum položimo na agarozni gel ali celulozno acetatni film. Uporabi se tudi kontrolni serum. Nanosu sledi elektroforetsko ločevanje vzorcev. Antiserumi, IgG, IgA, IgM, ocetna kislina za normalno elektroforezo in kappa se med ločilnima linijama nanese lambda. To vzpostavi reakcijo s protitelesi pacientovega seruma, ki ustvarjajo padavinske črte. Glede na uporabljeni antiserum in položaj ter obliko posameznih črt lahko sklepamo o imunoglobulini s kappa ali lambda lahkimi verigami. V primeru lambda pasu so prisotne proste lahke verige protiteles. Z uporabo redkih IgE in IgD laboratorij zagotovi dodatne dokaze, ki omogočajo natančno določitev imunoglobulini. Postopek imunodifuzijske elektroforeze poteka po Pierru Grabarju in Curtisu Williamsu in ustreza kombinaciji elektroforeze v agaroznem gelu beljakovin in difuzija protiteles. Najprej poteka elektroforeza v agaroznem gelu. Nato se protitelesa, ki jih vsebujejo, difundirajo proti pasom antigenov in tako povzročijo obarjanje lokov. To je treba ločiti od Laurell's Rocket imunoelektroforeze, ki ustreza elektroforezi na beljakovin v agaroznem gelu, od katerih vsako vsebuje protitelesa v določeni meri koncentracija. Gel vsebuje nekoliko bazičen pufer, ki omogoča samo selitev antigenov in potisne večino protiteles v izoelektrično točko z izpostavljenostjo rahlo bazičnemu pH, dokler se ne prenehajo gibati elektroforetno. Na začetku imunske elektroforeze Rocket je presežek antigena, zato nastanejo topni kompleksi antigen-protitelesa. Med elektroforezo pride do dodatne vezave med antigeni in dodatnimi protitelesi. Na točki enakovrednosti na ta način nastanejo imunoprecipitati, ki spominjajo na raketne figure z višino, sorazmerno antigenu koncentracija. Za oceno testa se izmeri višina oborine.
Tveganja, neželeni učinki in nevarnosti
Odkrivanje monoklonskih protiteles je še posebej pomembno za diagnozo multiplega mieloma in Waldenstromove bolezni. Dobljeno odkrivanje kaže na maligno degeneracijo imunskih celic. Multipli mielom ustreza a rak od kostni mozeg za katero je značilno maligno razmnoževanje celic, ki proizvajajo protitelesa v plazmi. Te plazemske celice proizvajajo protitelesa in njihove fragmente. Maligne plazemske celice vedno izvirajo iz skupne matične celice in so tako genetsko enake. Proizvajajo izključno monoklonska protitelesa. Malignost te bolezni lahko ustreza predrakavi fazi, lahko pa doseže tudi zelo maligno stopnjo, ki je hitro smrtna brez zdravljenja. Simptomi bolezni so posledica maligne rasti celic ali protiteles in fragmentov protiteles. Najpogostejši simptomi vključujejo bolečine v kosteh, raztapljanje kosti in spontani zlomi kosti. Kalcij ravni v kri so pogosto povišane. Poleg tega se nenormalna protitelesa pogosto zadržujejo v tkivih in povzročajo disfunkcijo organov, kar lahko vodi do manifestacij, kot so ledvice odpoved ali moten pretok krvi. Waldströmova bolezen je tudi maligna tumorska bolezen. Natančneje, gre za maligno bolezen limfom bolezen, ki je razvrščena kot počasi napredujoča in skoraj asimptomatska B-celičnaHodgkinov limfom. V večini primerov je pri bolezni mogoče zaznati nenormalne produkcije monoklonskega IgM, ki so posledica aktivnosti malignih limfom celic. Waldenströmova bolezen je po svojih značilnostih zelo podobna multiplim mielomom, vendar običajno kaže na ugodnejši potek. Večina bolnikov z Waldenströmovo boleznijo je do diagnoze večinoma asimptomatska. Drugi bolniki kažejo zgodnje simptome, kot so nespecifični utrujenost ali periferne nevropatije, ki so posledica odlaganja monoklonskega IgM znotraj mielinska ovojnica. Tudi majhne količine IgM lahko povzročijo polinevropatija. Pri drugih bolnikih polinevropatija se ne pojavi niti pri visokih ravneh. Poleg tega so nespecifični simptomi, kot so povišana telesna temperatura, neželena izguba teže, ali pa se lahko pojavi nočno znojenje. Bolečine v kosteh je tudi značilno. Zaradi prekomerne proizvodnje IgM kri postane hiperviskozna, tako da so zgornji simptomi lahko povezani s simptomi sindroma hiperviskoznosti. To nagnjenost k krvavitvam se v večini primerov pokaže pogosto krvavitve iz nosu, glavoboli, splošen občutek slabega počutja ali zamegljen vid in akustične težave. Za odkrivanje tovrstnih malignomov imunoelektrofereza že dolgo postane standardni diagnostični postopek.
