Eno-gen analiza je ciljno usmerjena metoda genetskega testiranja.
V okviru tega postopka se ob sumu na dedno bolezen, ki jo sproži ena sama sprememba a gen, se preuči gen, za katerega obstaja sum, da je vzročen. To se pogosto izvaja tudi rutinsko v okviru presejalnih pregledov.
Indikacije (področja uporabe)
- Diagnostika monogenskih bolezni, npr cistična fibroza.
Postopek
Potreben material
- Heparinska kri (najmanj 1-2 ml)
Priprava pacienta
- Ni potrebno
Moteči dejavniki
- Ni znano
Laboratorijska metoda
Najpogosteje metoda zaporedja, ki se uporablja prigen Analiza je Sangerjeva metoda, imenovana tudi sintezna zaključna veriga, pri kateri gre najprej za izolacijo DNA iz kri. Potem pa vsi vodik vezi, ki služijo za držanje dvoverižne DNA skupaj, se pretrgajo. Po eni minuti segrevanja pri 94-96 ° C sta prisotni dve posamezni verigi. Nato pride do tako imenovane primerne hibridizacije, s katero je pritrjen temeljni premaz. To poteka pri približno 60 ° C. Primer je oligonukleotid (oligomeri, sestavljeni iz nekaj nukleotidov), ki služi kot izhodišče za razmnoževanje DNA encimi kot je DNA polimeraza. Po hibridizaciji primerja pride do ekstenzije, pri kateri se temperatura poviša na 72 ° C. To omogoča primerku, da se pritrdi na DNA polimerazo (encimi ki sintetizirajo DNA). Po povprečno 30 ciklih lahko postopek ustavimo.
Nadaljnjo analizo izvaja kapilare elektroforeza v avtomatiziranih sekvencerjih. Rezultat se imenuje elektroferogram. To prikazuje različne barve, ki označujejo osnovno zaporedje.
S to metodo lahko zaznamo mutacije, ki vključujejo samo eno nukleinsko bazo znotraj gena, znane tudi kot točkovne mutacije.
